Tartalom
A Lise görög szó, és egyszerűen azt jelenti, hogy "osztani" vagy "lebomlani". Ez jól leírja azt a reakciót, amely a sejtekkel egy lízispufferben megy végbe, amely megoldás lebontja őket tartalmuk kivonása céljából. A tudósok ezeket az oldatokat használják a DNS vagy fehérjék kivonására a sejtanalízis során, különösen a baktériumok esetében. A sejtlízis puffer típusa a kísérlet típusától függően változik, azonban megemlítünk néhány általános választást.
Puffer és só
A pufferoldatok stabilizálják a pH-t, míg a sejtek lebomlanak. A trisz-HCL oldat a leggyakoribb puffer a pH 8-on történő puffereléshez, ha a pH kívánatos. A HEPES egy másik gyakori pufferoldat ezekben a kísérletekben. Nátrium-klorid is hozzáadható az ionerősség, az oldott anyagok összes koncentrációjának növelése a sejteken kívül. Ez utóbbi fontos, mivel a víz minden sejtmembránra átterjedhet, az alacsony oldott anyag koncentrációjú régióktól a magas koncentrációjú területekig.
Mosószer
A mosószer a fő összetevő, amely feloldja a sejtmembránt, hogy a tartalma el tudjon távozni. A mosószerek amfipatikus molekulák, vagyis az egyik végük könnyen kölcsönhatásba lép a vízmolekulákkal, míg a másik hidrofób végük, vagy "amely fél a víztől", nem ezt a kölcsönhatást végzi. Feloldhatják a zsírokat micellák, kis csoportok kialakításával, amelyekben a detergens molekulák hidrofób farka befelé mutat a zsírmolekulák felé. A szokásos detergensek a nátrium-dodecil-szulfát vagy SDS, NP-40 és a tritonX.
Kelátképző szerek és inhibitorok
A lízispufferek általában kelátképző szereket, például etilén-diamin-tetraecetsavat (EDTA) vagy retilénglikol-tetraecetsavat (EGTA) is tartalmaznak. Ezek a vegyi anyagok +2 töltéssel kötődnek a fémionokhoz (például magnézium és kalcium), így más reakciókhoz nem állnak rendelkezésre. Sok DNS-nek (fehérje, amely rágja a DNS-t) és proteázoknak (fehérjék, amelyek más fehérjéket vágnak le) magnéziumionokra van szükségük a működéshez, ezért azzal, hogy megfosztják őket ettől a fő összetevőtől, az EDTA-tól és az EGTA-tól, segítenek csökkenteni a proteáz szintjét, ill. a DNS-aktivitás. Ezeket azonban nem zárják ki teljesen, és egyes proteázok nem függenek a magnézium-kofaktoroktól, ezért a lízispufferek olykor proteáz-inhibitoroknak nevezett anyagokat is tartalmaznak, amelyek kötődnek hozzá és megakadályozzák a megfelelő működését.
Lúgos lízis
A lúgos lízis nagyon elterjedt technika a plazmidok baktériumoktól történő megtisztítására. Ez a módszer három megoldás alkalmazását jelenti. Az első glükózt, tris-HCL puffert, EDTA-t és RNS-eket tartalmaz. A glükóz nagy koncentrációjú oldott anyagot hoz létre a baktériumokon kívül, így azok kissé petyhüdtté válnak, megkönnyítve a lízis folyamatát. Az EDTA és a trisz-HCL a korábbiakban leírtak szerint működik, míg az RNSse a sejt belsejében lévő RNS-t megrágja, hogy eltűnjön. A második megoldás hatékonyan végzi a sejtek lízisét. Tartalmazza az SDS és NaOH detergenseket, amelyek a pH-t 12-re vagy annál magasabbra emelik, denaturálják a sejtben lévő fehérjéket és a DNS-t egyszerű szálakra válnak szét. A harmadik oldat kálium-acetátot tartalmaz a pH semlegesebb szintre történő visszaállításához, hogy a plazmid DNS-szálak összeérhessenek. Eközben a denaturált fehérjék összeérnek és kicsapódnak, míg a dodecil-szulfátionok a káliumionokkal egyesülve oldhatatlan vegyületet képeznek, amely szintén kicsapódhat az oldatból.